Th9細胞：Th9 細胞是一種新型的輔助性T細胞的亞群，它對抗寄生蟲感染特別是線蟲起著重要作用。IL-4 與 TGF-β同時作用可誘導初始T細胞分化成 Th9 細胞，Th2 細胞在 TGF-β作用下可轉化為 Th9 細胞。除了分泌抗炎性細胞因子 IL-10 外，Th9 同時也與炎性疾病相關，比如過敏性炎癥。Th9 細胞不表達其它Th細胞已知的特異轉錄因子，包括 T-bet， GATA-3， Foxp3 還有 ROR γt， 其中 GATA-3 在 Th9 分化初期一度出現(xiàn)。分泌的細胞因子主要為 IL-9 和 IL-10。

小鼠脾臟細胞Th9極化實驗

1.根據(jù)實驗方法從小鼠脾臟中分離出細胞。

2. anti-mouse  CD3ε 包被實驗：在細胞培養(yǎng)板上，加入 anti-mouse  CD3ε, clone 145-2C11  (5μg/ml)。37℃孵育2小時或者4℃過夜。然后將液體輕輕地倒出，用無菌 PBS 進行清洗3次，棄上清。

3.將分離出的脾臟細胞以1 x 106/ml的濃度種于包被好的培養(yǎng)板中，同時加入 anti-mouse  CD28, clone 37.51 (5μg/mL)， TGF-β1 (10 ng/mL), IL-4 (10 ng/mL), IL-2 (20ng/ml), anti-mouse  IFN-β (10μg/mL)進行培養(yǎng)。

4.細胞培養(yǎng)3天后，收集細胞進行清洗。然后用含有500 ng/ml PdBU, 500 ng/mL  ionomycin,  以及 Brefeldin  A  的培養(yǎng)基對細胞進行刺激4-5小時。

5. 細胞結束刺激后，收集細胞，進行染色實驗。

相關實驗材料

RBC  Lysis  Buffer  ( cat. # 420301 )， Anti-mouse  CD3e,  clone  145-2C11  ( LEAFTM  format,  cat. # 100314)， Anti-mouse  CD28,  clone  37.51,  ( LEAFTM  format, cat. # 102112 )， Anti-mouse  IFN-g  ( LEAFTM  format, cat. # 505812 )， Recombinant  mouse  IL-4  ( cat. # 563202 )，R ecombinant  human  TGF-b1  ( carrier-free )  ( cat. # 580702 )， Recombinant  mouse  IL-2  ( cat. # 575402 )，  Brefeldin  A  ( cat. # 420601 )， PMA  ( cat. # P8139  from  Sigma )， Ionomycin  ( cat. # I0634  from  Sigma )

參考文獻：

1. Soler, D. et al. 2006. J Immunol. 117:6940.           

2. Schmitt, E. et al. 1994. J Immunol. 153:3989.

3. Veldhoen, M. et al. 2008. Nat Immunol. 9:1341.      

4. Darhalhon, V. et al. 2008. Nat. Immunol. 9:1347.