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提高BAC,F(xiàn)osmid文庫拷貝數(shù),您只差了一支誘導(dǎo)劑

作者:admin信息來源:達(dá)科為日期:2018年03月26日打印字體:  
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首先安利一下Epicentre的專利技術(shù)——CopyControl?克隆系統(tǒng),能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優(yōu)點(diǎn)。CopyControl?克?。菏紫纫詥慰截愋问缴L,單拷貝可以確保插入穩(wěn)定及成功克隆編碼基因序列;在需要的時(shí)候,通過誘導(dǎo)液誘導(dǎo)成高拷貝克隆,以便下游應(yīng)用所需。這一系統(tǒng)可以用來構(gòu)建PCR克隆,對于BAC,F(xiàn)osmid文庫等大型質(zhì)粒格外有用。

CopyControl?克隆系統(tǒng)有兩個(gè)重要成分,相輔相成,缺一不可:

1.CopyControl? pCC1和pCC2載體

pCC1和pCC2載體含有兩個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn):單拷貝的大腸桿菌F-因子復(fù)制子和誘導(dǎo)型的高拷貝oriV。其中OriV的啟動(dòng),需要trfA基因產(chǎn)物,由CopyControl?的另一個(gè)重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。

圖1 pCC1載體圖譜

2.TransforMax? EPI300 E.coli

這是一種工程菌株,含有受誘導(dǎo)啟動(dòng)子控制的trfA基因,在誘導(dǎo)的條件下可以提供啟動(dòng)oriV所需要的trfA基因產(chǎn)物。 

圖2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型

 

CopyControl?克隆誘導(dǎo)步驟



圖3 CopyControl?克隆流程

 

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